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小鼠麻醉指導原則
目的(de)
本文是由ARC獸醫人員設計的小鼠麻醉指導(dǎo)原則,旨在提供一般建議。這並不意味著它包含了適用於小鼠的所有可能藥物(wù)組合的詳盡列表。具體(tǐ)的(de)麻醉方案應根據特定情況和研究(jiū)需求與所在(zài)機構的獸醫合作製定。
麻醉是使動物完全或部分失去感覺,伴隨或不伴隨意識喪失。動物可能需要麻醉進行手術、可能(néng)引起疼痛的非手術操(cāo)作,或需要固定的(de)非疼痛操(cāo)作。在麻醉前、麻醉過程中(zhōng)和麻醉後,必須采取措施確保動物的安全和麻醉的有效性。
麻醉(zuì)可通過胃腸外給藥或吸入給藥的方式進行。藥物的選擇取決於具體操作、研(yán)究目的和其他因素,如動物的年齡。對於新(xīn)生小鼠,有些特別考慮下文進行了概(gài)述。如(rú)對藥物(wù)選擇有疑問,請谘詢所在機構的獸醫。
01、麻醉的一般指導原則和注意(yì)事項
適(shì)應期:建議所有動物在運輸後適應(yīng)一周,以防止(zhǐ)應激(jī)引起的反應。動物至少需要72小時才能恢複(fù)到基本(běn)生理狀態(tài)。
禁食:由於小鼠無法嘔(ǒu)吐,通(tōng)常麻醉前無需禁食(shí)。然而,如需禁食(shí)(例(lì)如為了(le)保(bǎo)持體(tǐ)重),因小鼠的高代謝率,禁食時間不應超過(guò)2-3小時。請注(zhù)意,切勿限製飲水。
眼睛保(bǎo)護:在麻醉狀態下(xià),小鼠的眼睛會持續睜開,可能導致角膜幹燥和損(sǔn)傷。因此(cǐ),在如下條件下,應塗抹眼膏(如Puralube® 或 Lacrilube®)來保護眼睛。
麻醉持(chí)續時間超過 5 min;
通過麵罩進行麻醉。
監護:無(wú)論使用何種麻醉劑,均應監測麻醉狀態下(xià)的小(xiǎo)鼠,以確保心髒和(hé)呼吸功能不(bú)被過度抑製,以及(jí)麻醉深度適當。
在沒有專用設備(bèi)的情況下,可以監測以下麻醉小鼠的參數:
麻醉(zuì)深度(dù):通(tōng)過掐指檢查;
呼吸頻(pín)率和模(mó)式(shì):正常(cháng)未(wèi)受幹擾的呼吸率約為(wéi) 180 bpm,麻醉期間可接受 50% 的緩慢下降速率;
粘膜顏色:應為粉紅(hóng)色而非藍色或灰(huī)色;
體溫:可使用直腸溫度計監測體溫,體溫應保持在 36℃ 以上;
血氧飽和度和(hé)心率:可用專用的(de)齧齒類動物脈搏式血氧儀監測血氧飽(bǎo)和度 (> 95%) 和心率(300-800 bpm);
如對監護或監護設備有任何問題,請與所在(zài)機構的獸醫聯係。
保溫:所有種屬在麻醉狀態下均存(cún)在低體溫的(de)風險。小鼠由(yóu)於體表麵(miàn)積與體重比高,尤其容易受到影響。低體溫對動(dòng)物會產生顯著的生理應激,可能延長恢複時(shí)間並有潛(qián)在致(zhì)命風險。
在所有麻醉過程中提供額外的保溫措施。
補(bǔ)充熱源包括循環水毯、電熱(rè)墊和可在微波或(huò)水浴中加熱的市售產品(如等溫墊或凝膠(jiāo)加熱器)。
切勿直接將動物放在(zài)熱源上。
如對使用或購買額外的保溫來源有疑問,請與您所在機構(gòu)的獸(shòu)醫聯(lián)係。
補液:在麻(má)醉時間較長或動物患病、老年或虛弱的情況下,考慮腹(fù)腔或皮下注射溫熱的液體。更多(duō)信息請谘詢您的獸醫。
恢複:持續監(jiān)測動物直至其完全(quán)恢複。
在幹淨的籠子裏,將動物放在(zài)紙巾(jīn)上(不(bú)使(shǐ)用墊料)。這樣可以最大程度地減少氣管阻塞或(huò)肺(fèi)炎的風險。
麻醉後的動物單獨放在一個籠子裏進行(háng)恢複。
恢複期間繼續提供(gòng)額(é)外的保溫。
當動物(wù)能夠走(zǒu)動時,將其(qí)送回原籠中子,並提供飼料和水。
根據所進行的手術,為(wéi)了避免同籠夥伴啃縫線或切口處的創傷,小鼠可能需要在術(shù)後階段單獨飼養。任何單獨飼養的計(jì)劃都應包括在IACUC方(fāng)案中,以便進行審查和批準。
02、麻醉藥物和程序
吸入麻醉劑: 異氟(fú)烷是首選的吸入麻(má)醉劑。 起效快、恢複可(kě)靠。
A. 吸入麻醉可以通過滴瓶法(fǎ)、誘導室、麵罩或氣管插(chā)管使用精密蒸汽器進行。
i.滴瓶法:
a.請勿使小鼠(shǔ)直接接觸液體吸入麻醉劑(jì)(可(kě)通過在棉花或紗布上放(fàng)置不可滲透的網格來實現)。
b. 由(yóu)於無法控製室內的麻醉劑濃度,並且濃度可能迅速達到有毒水平,因此該方法僅適用於非常短的手術,如尾部活檢、皮下(xià)腫瘤植入(rù)或麵罩麻醉前的誘導。
ii.誘導室、麵罩和(hé)氣管插管(guǎn):
a.這些需要配備(bèi)氧(yǎng)氣源和精密蒸發器的氣體麻醉機。一些研究單位可能使用室內空(kōng)氣而不是純氧作為氣源,這也是可接受的(de)。
b.蒸發(fā)器必須與特定的吸入(rù)麻醉劑兼容。
c.由於小鼠呼吸能力較(jiào)小,使用非循環呼吸係統。
iii. 當使用吸入性麻醉時,使用通風櫃或配備氣體清(qīng)除係統的麻醉係統,以盡量減少職業暴露於排出氣體。
B. 注射麻醉劑:氯(lǜ)胺酮/賽拉嗪聯合使用是小鼠的首選注射麻醉劑。
下麵列出了其(qí)他常用的注射劑。
i. 小鼠對各種麻醉藥的敏感性差異顯著。 年齡、體質、品(pǐn)係(xì)、健(jiàn)康狀況、基因調(diào)控和性別等因素都可能影(yǐng)響麻醉敏感(gǎn)性。以下劑量僅為一般指導(dǎo)原(yuán)則,基於上(shàng)述因素可(kě)能(néng)存在顯著差異。在您的方案中添加麻醉劑時,建議提供一個(gè)範圍,以允許根據每隻動(dòng)物的特定需求進行給藥。
ii. 不建議在小鼠中進行肌肉注(zhù)射(shè)(IM),因為可能導致組織刺激、跛行和自殘等並發症。
*一個很好(hǎo)的初始(shǐ)方案是 100 mg/kg 氯胺酮和 7 mg/kg 塞拉(lā)嗪。
**阿替美唑(5 mg/mL)是右美托咪定(0.5 mg/mL)濃度的 10 倍。
您需要 4-6 倍於(yú)右美托咪(mī)定體積的阿替美唑(5 mg/mL)來(lái)逆轉右美托咪定。然而,阿替美唑(zuò)的安全範圍非(fēi)常高,因此如果逆轉非常緊急,給予右美托咪定(dìng)等體積的阿替美唑,可使阿替(tì)美(měi)唑(zuò)的劑量增(zēng)加 10 倍,這是安全的。
同樣,使用與(yǔ)塞拉嗪(20 mg/mL)等(děng)體積的(de)阿替美唑 (5 mg/mL) 逆轉也有效。雖然塞拉嗪具有更高的濃度(20 mg/mL),但阿(ā)替美唑(5 mg/mL)更純淨,且與α2 受體結合(hé)更緊密,因此等(děng)體積逆轉塞拉嗪也可行。
C. 注射麻醉劑的一種類型是局部麻醉劑。
i. 局麻藥通過(guò)特異性結合神經細胞膜上的電壓門控 Na + 通道來阻斷神經衝動。
ii. 給藥途(tú)徑包(bāo)括粘膜(鼻、眼等)局部給藥或直接注射到組織和神經束(shù)周圍。
iii. 在疼痛刺激(jī)(如切口)之(zhī)前給予局部麻醉劑(jì)被認(rèn)為是輔助鎮痛藥物,與阿片類和 非甾體(tǐ)抗(kàng)炎(yán)藥(NSAID)一起使用。
iv. 由於持續時間較短(duǎn)(數小(xiǎo)時),不(bú)鼓(gǔ)勵將(jiāng)局部麻醉劑作為主要鎮痛藥物使(shǐ)用,
03、對小鼠麻醉的特殊考慮:仔鼠麻醉
目前文獻中描述了幾種適用於新生齧齒動(dòng)物的麻醉方法,包括注射麻醉、吸入麻醉和低溫麻醉。
新生齧齒動物的麻醉會導致(zhì)親代啃食後代的問題。可通過確保新(xīn)生仔鼠完全恢複後再歸還給母鼠來減(jiǎn)少這種情(qíng)況。其他措施包括讓幼仔接觸來(lái)自於母鼠籠中的汙染墊料,並將幼仔放在窩仔中間位置。
低溫麻醉
低溫(wēn)麻醉隻(zhī)適用於7日齡以下的新生齧齒動物,並且不應用於持續時間超過30分鍾(zhōng)的手(shǒu)術。
動物不(bú)應直接置於冰(bīng)上(在動物和底層冰浴之間使用乳膠手(shǒu)套或其他(tā)物質)。
當足(zú)部反射消失時,動物已達到適當的麻醉水平。
手術過程中(zhōng)請勿使用白熾燈,因為它會使手術區域變熱,導致動物從手術麻醉(zuì)狀態中蘇醒(xǐng)。
麻醉後,動物應緩慢複溫(wēn)。快速升溫可能會導致(zhì)組(zǔ)織損傷。可使用循環水毯、加熱墊 (40℃) 或培養箱 (33℃) 中給動物(wù)重新升溫。
幼仔能夠在無直(zhí)接物理刺激的情況(kuàng)下(xià)移動後,可將其歸還給母鼠。
吸入麻醉
新生(shēng)齧齒動物可能比成年齧齒動物需要更長的吸入麻醉誘導時間(jiān)。
在麻醉盒中進行(háng)誘導通常需 5% 異氟烷,維持(麻醉誘導盒或鼻錐)需 1-2%(流速 = 0.3-0.6 L/min)。
注射麻(má)醉
氯胺酮/塞(sāi)拉嗪是 7 日齡以上小鼠的推(tuī)薦注射麻醉劑:通過(guò) 27g 針頭 IP 注射 50-150 mg/kg 氯(lǜ)胺酮和 5-10 mg/kg 塞拉嗪(最大體積 = 0.5 mL)。
對於7日齡以上的小(xiǎo)鼠,推薦使用氯胺酮/塞拉嗪作為注射麻醉劑:使用(yòng)27g針頭腹(fù)腔注射50-150 mg/kg氯胺酮和(hé)5-10 mg/kg塞拉嗪(qín)(最大體積=0.5 ml)。