非人靈（líng）長類動物（wù）（NHP）精液樣本采集有多種目的，包括生殖研究、物種保護、傳染病研究以及在藥（yào）物開發過程中（zhōng）評估生殖安全性。在生物醫藥研究（jiū）中最常見的精液采集方法是電（diàn）刺激和陰莖振（zhèn）動刺激。電刺激是利用電流刺激NHP動（dòng）物產生射精的過程。最（zuì）常用（yòng）的電刺激方法是直腸探針電刺激法（RPE）和陰莖（jīng）電刺激法（PEP）。據報（bào）道，直腸探針電刺激產生的樣（yàng）品精子濃度低於陰莖電刺激。因此，它通常被認為不太適合於精液樣本的定量評價，而用於定（dìng）性分析。陰莖電刺激最常（cháng）用於收（shōu）集精子進行定量分析，例如，測定精子數量和/或濃度，因為該方法采集到的精液量較大。而對於小型非（fēi）人靈長類動物（如鬆鼠猴和狨猴），陰莖振（zhèn）動刺激法（fǎ）（PVS）是比電刺（cì）激法更優的（de）采精方法，因為（wéi）它更適合這些動物的生理特點（diǎn），同時（shí）對（duì）動物的福利影響較小。

直腸探針電刺激法（RPE）

描述（shù）：這是較早使用的NHP采精方法。通（tōng）過直（zhí）接刺激盆腔（qiāng）器官周圍的神經肌肉，導致盆腔器（qì）官收縮和放鬆，從（cóng）而排出內容物。該（gāi）過程需要對動物進行輕度麻醉，但不需要對動物進行（háng）訓練（liàn）。操作者的技術和培（péi）訓對程序（xù）的成功至關重要。

操作步驟：動物被（bèi）輕度麻醉後側臥或在保定架上俯臥，使用合適大小的（de）探針，在插（chā）入探針（zhēn）前，電極需輕磨、衝（chōng）洗和消毒。陰莖被輕輕拉出並清潔（可用無菌生（shēng）理鹽水），然後（hòu）在探針上塗上一層薄薄的水溶性潤滑凝膠。探針電極需對（duì）準前列腺，為了確保電極與（yǔ）前列腺接觸，可將探頭的另一端抬起，輕輕向下按壓（yā）探頭的尖端。通過逐漸增加電壓直到動物出現腿部伸展等反應，確定動（dòng）物的電壓設定點。達到反應點後（hòu），電壓保持不變一段時間（最多約5秒），然後逐（zhú）漸降低。這種電壓的（de）逐步增加、保持和降低構成了一個完整的刺激周（zhōu）期。通過多次刺激，通常三組刺激可以（yǐ）產生射精。在整個刺激過程（chéng）中，陰莖的尖端需要（yào）保持在預熱的玻璃燒杯或其他收集容器上方。

適用場景：由於這個（gè）方法（fǎ）產生的樣本（běn）精子濃度（dù）較低，因此更適合用於定性分析，如檢測精液中精子的存在以確認性成熟，以及評（píng）估（gū）精子細胞的形態。

陰莖電刺激法（PEP）

描述：該方法通過刺激陰莖中的傳入神經末梢，隨後將刺激傳遞到與陰莖勃起和射（shè）精相關的傳出神經通路。該（gāi）方法在動物清醒狀態下采集，傳統的保定方式是使用猴杆或者頸圈（quān）將動物固定在開放式的猴椅上，但近期有研（yán）究表明使用封閉箱椅（closed box chair）是一種（zhǒng）更優（yōu）化的保定方式，可以訓練動物直接從籠（lóng）子進入封（fēng）閉箱椅內，對動物福利、精（jīng）液質量都有（yǒu）顯（xiǎn）著（zhe）改善。PEP已被證明能夠（gòu）更好地刺激整個生（shēng）殖道，並且由於無需麻醉，減少了尿液（yè）汙染和精液樣本（běn）稀釋的問題（tí）。此外，與直腸探針法（fǎ）相（xiàng）關的逆行射精（精液進入膀胱）的風險在陰莖電刺激法（fǎ）中被最小化。這種（zhǒng）非（fēi）侵入性技術確實需要對動物進行訓練，並且需要控製（zhì）實驗（yàn）環境（例如安靜（jìng）的房間、熟悉（xī）動（dòng）物的（de）工作人員）。與直腸探針電刺激技術相比，這種（zhǒng）方法可能需要更長的時間來獲取樣（yàng）本，但通常不會超過幾（jǐ）分鍾。陰莖電刺激法的（de）一個潛在缺點是，有些動物對陰莖刺激沒有反（fǎn）應，因（yīn）此無法提供精液樣本。

操作步驟：將陰莖（jīng）輕輕拉出，用潤滑凝膠包裹的（de）除顫器墊包（bāo）裹陰莖，將電極連接到電刺激器設備上。從低電壓開始刺激（根據動物的品種和體格（gé））不超過15秒，逐漸增加到預設的最大（dà）值。每次刺激時，觀察動物的（de）生理反應和射精，整個過程（chéng）通（tōng）常不超過3次刺激。不同品種的電壓刺激相差較（jiào）大，對於食（shí）蟹猴而言，可以（yǐ）從10-30伏特開始（shǐ），如果需要，可以以 5-10 伏特的增量逐步增加，最高至約50 伏特。在（zài）刺激過程（chéng）中將收集管放（fàng）在（zài）陰莖（jīng）尖（jiān）端以收集射精的（de）精液樣本。

適用場（chǎng）景：該方法適用於（yú）需要較高精子數量和質量（liàng）的場景，如體外受精（IVF）或單精子（zǐ）卵胞漿內注射（ICSI），因為其能（néng）獲得更高的（de）精液量和精子濃度。

陰莖振動刺激法（PVS）

描述：該方法利用自然反射，產生正常的射精反應（yīng），從而獲得自然射精。使用經過改（gǎi）裝的振動設備，並配備收集容器。該方法通常將清醒的動物保定在猴椅上，並在黑暗的房間中進行，避免動物過於激動。

操作（zuò）步驟：將陰莖輕輕從包皮鞘中拉出，將振動玻璃管放在陰莖尖端並保持接觸。根據動物（wù）對（duì）刺激的反應逐漸調整振動參數（shù），並在（zài）刺（cì）激期間（jiān）提供休息時間。如果在15-20分鍾內未達到射精，則停止刺激。

適用場景（jǐng）：在小型非人靈長類動物（如鬆鼠猴和狨（róng）猴）中，PVS是首選方法，因為這（zhè）些動（dòng）物（wù）體型較小，直（zhí）接放置電極進行陰莖刺激較為困難，且直腸探針法在這些小型NHP物種中也不（bú）太適用，較小的生（shēng）殖道和消化道結構可能無法讓直腸探針精準放置。

同時，對鬆鼠猴和狨（róng）猴的研究發現，與（yǔ） RPE 采集的樣本相比，振動刺（cì）激采集的精液樣本中（zhōng）精（jīng）子和附屬腺的產生顯著增加。PVS 可產生質量（liàng）更高的射精，結合了不需（xū）要鎮靜或（huò）輕度麻（má）醉的優點，幾乎不引起不適，並產生無汙染的自然射（shè）精（jīng）。

無論采用何種精（jīng）液（yè）采集方法，均應慎重考慮采精動物的選擇。確認精子發生（通過檢測精液中的精（jīng）子）是確（què）認 NHP 性成熟的最可靠方法。在一些 NHP 種屬中，精液采集時間應（yīng）考慮季節性。在此（cǐ）類確認之前，可通過應（yīng）用常規選擇標準（如年齡（líng）、體（tǐ）重和/或睾丸體積）優（yōu）化動物的選擇。睾酮由於其脈衝式/晝夜節律性波動和動物間個體差異較大，並不是可靠判定性成熟的指標。

性成熟的具體標準還取決於動物（wù）的種屬甚至地理來源。例如，來自毛裏求斯的食蟹（xiè）猴已被證（zhèng）實從 3-4 歲開始性成熟（精液中的精子），而來自亞洲大陸的食蟹猴需要額外一年（> 4 歲）才能達到性成（chéng）熟。關於食蟹猴和恒河猴的文獻表明，小於4歲和體重小於4kg的動物不太可能性成熟。

精（jīng）液采集操作的福利考量（liàng）

在精液采集時，也應關注動物福利的問題，比如直腸探（tàn）針電刺激法（RPE）比（bǐ）其他采精（jīng）技（jì）術更具侵入性，因為該方法需要將探針插入動物的（de）直腸（cháng），直接刺激前列腺和盆腔器官，可能（néng）會對動物造成一定的不適或潛在的（de）生理損傷。因此在進行直腸探針電刺激前，應仔細檢查直腸是否（fǒu）存在異常，如瘢痕、狹窄或痔瘡。操（cāo）作（zuò）者需（xū）要密切監控動物的反應和身體狀況，定期檢（jiǎn）查（chá）是否有出血或組織損傷的跡象。一旦發現異常，應立即停止操作並給予動物（wù）恢複的時（shí）間。同時，提（tí）供必要的操（cāo）作後護理和采精頻率的限製也是確保動物福利（lì）的重要措施。

而陰莖電刺激和（hé）陰（yīn）莖震動（dòng）刺激法雖（suī）然無創，動物也是無需麻醉在猴椅或者封（fēng）閉箱椅中操作，因（yīn）此操作過程中應關注的是（shì）對動物進（jìn）行馴化和保定適應，減少動物的應激。同時在電刺激時應（yīng）嚴（yán）格控製給（gěi）予刺激的電流，以及電刺（cì）激（jī）的次數。

通過上文（wén）描述，可以（yǐ）看（kàn）出（chū）選擇合適的動物以及合適的方法才（cái）能夠采集到合適的樣本，同時應關注動物的福利問題，最大程度減少對動（dòng）物的不利影響。